Серологические методы исследования

В организме человека происходит множество различных реакций, также ему приходится сталкиваться и с чужеродными объектами. В ответ на эти раздражители или антигены иммунная система человека дает адекватный иммунный ответ в виде антител. В лабораторной диагностике существует целый раздел или даже наука, изучающая иммунные реакции организма на чужеродные объекты – иммунология. Более узким направлением иммунологии является серология. Это наука о свойствах сыворотки (плазмы) крови.

Главной задачей серологии является изучение взаимодействия антигенов с антителами, содержащихся в сыворотке. Для выявления взаимодействия комплексов антител с антигенами используют различные реакции.

В медицинской практике серологические методы назначают для определения различных заболеваний. В первую очередь инфекционных, таких как сифилис, ВИЧ, хронические вирусные гепатиты и прочие. С помощью этих методов определяется группа крови человека. Также серологические методы используются в эпидемиологических мероприятиях для установления источника возбудителя каких-либо инфекций.

Методы являются эффективными и широко используются в лабораторной практике. Правда, встречаются и ложноположительные результаты, требующие дополнительных исследований.

Серологические реакции

К серологическим методам диагностики в первую очередь относят различные реакции. Они могут быть прямыми и косвенными. К прямым относят двухкомпонентные реакции: агглютинации, пассивной гемагглютинации и преципитации. Косвенные или трехкомпонентные включают реакции торможения или нейтрализации. Помимо реакций, существует метод иммунофлюоресценции и иммуноферментный анализ.

Реакция агглютинации

Под действием антител и изотонического раствора происходит склеивание и выпадение в осадок искомых клеток. Все реакции происходят в специальных микропланшетах, состоящих из лунок.

Реакцию прямой агглютинации проводят, например, при исследовании крови больного на брюшной тиф. Проводится реакция в виде добавления антигенов к сыворотке исследуемого, образующиеся комплексы выпадают в осадок.

При анализе на инфекционные заболевания чаще используют реакцию пассивной гемолитической агглютинации (РПГА). Суть метода заключается в том, что на внешней стенке эритроцитов имеются меченые антигены (возбудителя). На них прикрепляются антитела (белки) из сыворотки пациента, если таковые имеются.

Комплексы связываются и выпадают в осадок. Если на дне лунки выпадает плотное кольцо из эритроцитов, реакцию считают отрицательной, соответственно организм никогда не сталкивался с возбудителем. Если же осадок выпадает в виде «Зонтика», заполняя полностью всю лунку – результат положительный. Этот результат говорит о наличии в организме человека инфекционного заболевания.

Реакция торможения гемагглютинации основана на отсутствии агглютинации. То есть сыворотка способна нейтрализовать антигены вирусов. В результате они не могут прикрепляться к эритроцитам. Такую реакцию широко используют при исследовании вирусных заболеваний, чаще всего гриппа. Диагноз определяется по нарастанию титра антител больного.

Реакция преципитации

Принципом этого метода является склеивание комплекса «антиген-антитело» и выпадение его в осадок в виде преципитата (помутнения). При выполнении анализа этим методом антитела и антигены должны быть в равных концентрациях, в противном случае уровень образования комплекса значительно снижается.

Анализ проводится в пробирках, наслоением растворенного антигена на исследуемую сыворотку крови. В результате образуется кольцо (преципитат). Ширина кольца зависит от концентрации антигена. В настоящий момент чаще используется эта реакция в полужидком агаре или геле. В чашке Петре с агаром прорезаются лунки, в них закапываются антитела или антигены.

Различают два вида такой реакции:

простая иммунодиффузия – один компонент (антитело или антиген) размещаются в лунке, а другой смешиваются с агаром. В лунке с положительным результатом образуется мутное кольцо;
двойная иммунодиффузия – антитела и антигены размещаются по лункам. Реакция считается положительной при образовании между лунками мутной линии.

Реакция нейтрализации

Метод проведения основывается на специфике антител блокировать или разрушать действие токсинов или самих вирусов. Проводится эта реакции на культуре клеток. Если повреждения отсутствуют при смешении антител и вирусов, то можно говорить о взаимодействии комплекса «антиген-антитело».

Иммунофлюоресфентный анализ (РИФ)

Этот метод очень распространён в иммунологии при исследовании человека на сифилис. Суть метода остается та же – взаимодействие антител с антигенами. Только при этой реакции добавляется определенный реактив, помеченный красителем, который светится под действием ультрафиолетовых лучей.

Анализ проводится следующим образом. К исследуемой сыворотке добавляются меченые антитела. При положительной пробе образуются комплексы, которые отсматриваются с помощью флуоресцентной микроскопии.

Иммуноферментный анализ (ИФА)

Лабораторный анализ качественного или количественного определения различных соединений. В основе исследования лежит соединение комплекса антител и антигенов. Таким метод можно обнаружить протекание острого или хронического заболевания в организме человека.

Метод широко используется в медицине. В основном для скринингов, например, беременных на ВИЧ-инфекцию или краснуху.

Проводится анализ в микропланшетах. На их дне располагаются наслоенные антигены определяемого вируса. В каждую лунку добавляется сыворотка исследуемого и реактивы. Далее, планшет инкубируется, при этом и происходит реакции в виде изменения цвета. Затем с помощью ридера измеряется оптическая плотность каждой лунки. Чем она выше, тем выше концентрация возбудителя в организме человека.

Серология очень важна в лабораторной и медицинской практике. С помощью различных методов можно не только правильно диагностировать заболевание, но и предупредить его.

Подробнее про некоторые серологические методы:

Cергеева Екатерина Андреевна