Реакция прямой гемолитической агглютинации (РПГА)

Реакция прямой гемолитической агглютинации (РПГА) - распространённый метод исследования, используемый в лабораторной клинической диагностике. Метод агглютинации очень прост в своем исполнении, но при этом достаточно эффективен. В основном используется при эпидемических вспышках и в скрининговых исследованиях людей на различные инфекционные и бактериальные заболевания, такие как сифилис, дифтерия, менингококк, сальмонеллёз и т.д.

Еще один из плюсов этого анализа состоит в том, что можно не только определить наличие у человека заболевания, но и на какой стадии оно находится. Это очень помогает в выборе тактики лечения.

Суть метода

Человеческий организм обладает иммунной системой, именно она, столкнувшись с атакой вирусов или бактерий, защищает его. В итоге образуются специфические белки или антитела, именно их и определяют в крови человека.

Принцип метода РПГА основан на связывании антител, находящихся в организме, с антигенами микроорганизмов или риккетсий, которых ищут при подозреваемом заболевании. Если слипания между антителами и антигенами не происходит, значит, организм никогда не сталкивался с возбудителем.

В основном в реакции используются эритроциты, на оболочке которых уже наслоены антигены возбудителя. При взаимодействии с имеющимися антителами происходит склеивание и образуется видимый осадок.

Постановка реакции

Проводится реакции прямой гемолитической агглютинации на микропланшетах в специальных микролунках. Перед анализом готовится ряд десятикратных разведений исследуемой сыворотки.

В самом начале или конце планшета ставятся контроли. В положительный контроль добавляют сыворотку крови уже с антителами возбудителя. Отрицательный контроль состоит из физиологического раствора. Далее, в остальные лунки последовательно раскапываются разведенные эритроциты, с уже имеющимися антигенами. Планшет аккуратно перемешивается методом встряхивания и помещается в термостат для инкубации. После чего происходит контроль результатов.

Учет результатов

При учете результатов можно не только сказать, есть заболевание или нет, но еще и определить количество возбудителя. Соответственно, чем больше накоплено в организме антител, тем и результат будет больше. Считается численный результат в титре.

Например, при определении сифилиса у человека к сыворотке крови добавляют антигены трепонемы. Если у человека циркулирует заболевание, то в его крови накоплено уже достаточно антител. Поэтому антигены риккетсии и специфические антитела слипаются, образуя осадок – медицинским языком это называется агглютинацией.

Если учитывать результат в качественной реакции, то он отсчитывается по крестам «+». Определяется по выпавшему осадку в лунке. Положительным результатом считается осадок в виде равномерно распределенных агглютинированных эритроцитов. Напоминает раскрывшийся «зонтик». Отрицательный результат представлен в виде маленького кольца, который сконцентрирован на дне лунке. Он же напоминает «пуговку». Если реакция отчитывается как слабоположительная, то в лунке возникает что-то в виде плотного кольца, но при этом по краям образуются эритроциты.

Как сказано выше, учет ведется по четырем крестам:

• «+» - слабоположительная реакция, достаточно трудно по такому результату установить наличие, а тем более титр возбудителя. Обычно пациенту назначается пересдача через две недели. Если возбудитель присутствует, то за это время антитела в организме повысятся в несколько тысяч раз. Но результат может быть и ложноположительным. Причиной такой интерпретации является перекрёстная реакция. Она может появиться при наличии у человека:
  • инфекционных заболеваний (ВИЧ, гепатиты);
  • аутоиммунных заболеваний;
  • новообразований;
  • беременности;
  • наркотических средств в крови.
• «++» - также считается слабоположительной, но титр визуализируется больше. Это говорит о только начинающемся положительном процессе. При этом результат выглядит как кольцо, достаточно широкое с просветом в центре.
• «+++» - положительная реакция, агглютинированные эритроциты довольно равномерно располагаются по всей лунке, а по периферии образуют тонкое кольцо, напоминая «зонтик». Это говорит о протекании достаточно бурной инфекции в организме.
• «++++» - резко положительная реакция, эритроциты полностью распределяются в толще микролунки, иногда образуют тонкое кольцо по периферии. Оно образуется из-за высокой концентрации в организме антител.

Реакция проводится в сопровождении отрицательного и положительного контроля. В лунках с отрицательным должно быть плотное кольцо на дне, а при положительном – равномерное распределение эритроцитов по всему пространству лунки.

Показания

Анализ назначается пациентам при подозрении на наличие у них различных заболеваний. Проводится реакция в следующих случаях при:

• подозрении на сифилис, который проявляется в виде шанкра на слизистых оболочках половых органов, специфических кожных проявлений, алопеции;
• при контакте с инфицированными партнёрами;
• беременности;
• наркотическом или алкогольном опьянении;
• онкологических заболеваниях;
• энцефалите и боррелиозе;
• контроле уже переболевших людей.

Если есть подозрения или для большей достоверности, анализы для людей из «группы риска» рекомендуется пересдать через 4 недели, а затем держать на контроле и сдать кровь через три месяца.

Подготовка к анализу

Во избежание перекрестных реакций и неправильной трактовки результатов, пациент должен подготовится к анализу заранее. Кровь на этот вид анализа берется из вены.

Для этого нужно соблюсти несколько правил:

• анализ нужно сдавать натощак, накануне ограничившись легким, нежирным ужином;
• если есть необходимость, то можно пить воду без газов, но в малом количестве;
• за час до сдачи отказаться от курения, это минимальное время, лучше его увеличить;
• за день до анализа не употреблять алкогольные напитки и токсические препараты;
• отказаться от приема лекарственных средств, хотя бы в сам день сдачи. При невозможности, обязательно поставить врача, направившего на анализ, в известность.

Реакция прямой гемагглютинации является достоверным методом при исследовании различных инфекций в организме человека. Она широко применяется в диагностике.

Cергеева Екатерина Андреевна